高效液相色谱法测定

此方法参考中国药典（2015年）版蜜炙黄芪的高效液相色谱法测定方法。

供试品溶液的制备：精密称定黄芪甲苷对照品0.005g，转移至10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，即得。

供试品药材溶液的制备： 取3批黄芪粉末粉约4g，精密称定，放置在容器中，加入甲醇40ml，冷浸过夜，第二天将经甲醇浸泡过的粉末转移到索氏提取器中，再往其中加入适量甲醇，进行加热回流4小时，加热回流完之后将提取液回收并在蒸发皿上浓缩至干，再往其中加水10ml，稍微加热使其溶解，用经水饱和的正丁醇进行萃取4次，每次使用40ml正丁醇，合并溶液，再用氨水充分洗涤溶液2次，每次40ml，倒掉氨水，蒸发皿上将溶液蒸干，往剩下的残渣中加入水5ml使溶解，放冷，转移到大孔吸附树脂柱上，用适量的水进行洗脱，弃掉水液，再用40%乙醇适量进行洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，再将其蒸干，残余成分加入甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（32：68）为流动相；蒸发光散射检测器检测。

测定法:分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。

结果：由图（见附录A~B）可见3批供试品中的黄芪甲苷和黄芪甲苷的对照品峰的保留时间一致，并且与样品组分达到很好的分离；3批黄芪炮制品中的黄芪甲苷的含量（见表9）范围在0.053%-0.054%之间，根据中国药典（2015）版规定黄芪甲苷含量不得低于0.030%，，故本次的3批黄芪炮制品均合格。

结论

按照炮制工艺流程炮制出来的蜜炙黄芪在经过显微鉴别、薄层鉴别和含量测定等检测后，证实达到相应的工艺标准，所以在生产中蜜炙黄芪最佳炮制工艺为每黄芪与炼蜜的比例为5:1，炒制温度105~115℃，炒制2~3h。且每个操作步骤都符合工艺标准。

讨论

关于显微鉴别方法讨论

制片时，加水合氯醛，加上盖玻片，盖玻片从一侧轻轻放下，再加热透化，如此可以减少气泡，防止了气泡的干扰，方便观察。涂片时，不宜用太多粉末，否则片太厚，组织重叠，无法辨别观察。应该取米粒大小分量的粉末，制片观察。

关于薄层色谱讨论

实验过程中薄层板制备的好坏直接影响色谱结果。薄层应尽量均匀且厚度固定，否则展开时前沿不齐，色谱结果不易重复。点样要轻，不可刺破薄层。配置展开剂要注意混合均匀。如果混合不均匀的展开剂，会造成层析的完全失败。展开剂倒入展开缸的量要合适，不能让展开剂前沿上升至底线。否则，无法确定展开剂上升高度，即无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。操作中，喷板后，加热温度不宜过高，也不能加热太久，否则背景色会变深，影响观察。应该看到板上显现出点就停止加热，观察供试品色谱与鉴定药材色谱相应位置是否有相同颜色的点。