提取方法的设计

鸦胆子为苦木科植物鸦胆子（Brucea Javanica ( L. ) Merr. ）的干燥成熟果实，具有清热解毒，截疟，止痢的功效，外用腐蚀赘疣，用于治疗赘疣，鸡眼[4]。鸦胆子被分离出180多种成分，其中含有大量抗癌活性的油酸成分，田雪芹等从鸦胆子中分离出具有治疗疣癍活性的水溶性成分尿嘧啶[5]。鸦胆子常用石油醚、乙醇、超临界CO2、氯仿[6-7]等溶剂提取。本文拟采用高效液相色谱法，以鸦胆子亚油酸提取率为指标，优选鸦胆子油的提取方法；以尿嘧啶提取率为指标，采用L9（34）正交试验设计考察溶剂用量、乙醇浓度、提取时间和提取次数，优化提油后鸦胆子的提取工艺,为研发鸦胆子凝胶贴膏新药提供实验研究资料。

药材前处理

取鸦胆子药材，60 ℃下烘24 h，用粉碎机进行粉碎，过20目筛，用封口袋封口放置干燥器内保存，备用。

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色谱条件的选择

色谱柱：Phenomenex Gemini C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸二氢钾水溶液（50:50）；流速：0.8 ml/min；检测波长：265 nm；柱温：30 ℃；分析时间：15 min；进样量：10 μl。

对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液的制备 

精确称取6.0 mg尿嘧啶标准品，用甲醇定容于25 ml容量瓶，充分溶解，吸取适量样液用0.22 μm滤头过滤，装进液相小瓶，即得对照品溶液。

取适量脱脂后的鸦胆子药材，用6倍量纯水回流提取1 h，过滤，取滤液浓缩至与生药材等重，吸取浓缩液5 ml转移至25 ml容量瓶，用甲醇定容至刻度，吸取适量样液用0.22 μm滤头过滤进液相小瓶，即得供试品溶液。

吸取适量甲醇溶液，用0.22 μm滤头过滤进液相小瓶，即得阴性对照溶液。

系统适用性实验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液10 μl，按照3.4.1项下色谱条件测定，供试品溶液与对照品溶液在相同位置处有较大吸收峰，阴性对照溶液无干扰峰，尿嘧啶色谱峰与相邻色谱峰的分离度>1.5，故可认为尿嘧啶色谱峰不受干扰。色谱图见图2-5~2-7。