前处理

取山香地上部分，除去药材表面附着的泥沙等杂质。室温下阴干，切成小段，称重，得到山香干燥地上部分8670g。用中药打粉机粉碎成粗粉，过40目筛。不能通过40目筛的，重新粉碎，再次过筛。

提取

取山香干燥地上部分8670g，粉碎成粗粉，置于2000mL大锥形瓶中，分别用90%、70%、70%乙醇超声提取，料液比1﹕10，提取3次，每次1h。合并3次提取液，提取液减压浓缩（水浴温度控制在45℃以下）至无醇味，得浓缩液10L。再依次用等体积（约10L）的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对浓缩液进行反复萃取至有机层没有颜色为止。回收石油醚、乙酸乙酯、正丁醇。回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯部位浸膏39g。总成分提取流程图如图1所示。

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乙酸乙酯部位的分离及纯化

取乙酸乙酯部位浸膏(39g)，溶解在90ml 70%甲醇水（加DMSO助溶）中，过微孔滤膜。ODS柱色谱填充如下：ODS (500g，50～70μm)混悬在3L甲醇中，后转移至玻璃层析柱（长1m，半径3cm），充分浸泡一夜后，第二天逐步平衡到上样初始梯度。（100%-70%-50%-20%）每个梯度平衡4个柱体积。

分三次湿法上样：流动相液面放至与ODS填料相切后，将样品用吸管绕柱壁缓慢加入，样品吸附30min后，开始梯度洗脱：20%-50%-100%，每个梯度洗脱5个柱体积。每200mL接一瓶，TLC结合HPLC对接收液进行合并。合并结果如下：1~8, I；9~39，II（2.7g）；40~45，III（20g）；46~56，IIII（5.5g）；57~94，V（1.5g）；95~100，VI（0.9g）；101~104，VII（6.5g）；105~133，VIII。

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色谱柱填充材料的选择

化学成分研究一般对浸膏先粗分再细分。分离山香提取液的柱子填充材料一般使用正相硅胶，细分离则采用用MCI、ODS和凝胶LH-20（Sephadex LH-20)，其中用的最广泛的是凝胶LH-20。

硅胶柱色谱，是以硅胶为吸附剂，属于正相色谱，是一种较为广泛的分离方法，对于制备分离高分子化合物，挥发性差、热稳定性差而易分解的物质有很大的优势。C18柱是十八烷基硅烷键合硅胶填料(简称ODS)。这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70~80%的分析任务。由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛。凝胶LH-20是一种价钱较高的填料，具有适合用有机溶剂分离嗜脂性分子、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身、分离结构非常相近的分子、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生等特点。在本次实验中，主要对乙酸乙酯部分萃取得到的浸膏进行初步的分离，首先在......