印楝叶乙酸乙酯层的粗分-硅胶色谱制备法

取印楝叶乙酸乙酯层浸膏，利用薄层色谱摸索展开条件，最后得石油醚：乙酸乙酯8：2为最佳展开比例，故洗脱系统初为石油醚：乙酸乙酯。

将200～300目的硅胶采用湿法装柱，湿法上样，装入180cm×20cmI.D.的硅胶层析柱中，将乙酸乙酯萃取物以10:1的比例装入硅胶柱中，并用石油醚、乙酸乙酯或二氯甲烷、甲醇等有机溶剂的混合溶剂梯度洗脱，控制流出速度为5ml/min，以每500ml为一份收集洗脱液，并用薄层色谱检测收集到的洗脱液，点板，合并相同的馏分，用旋转蒸发仪在低于50℃的条件下真空蒸发溶剂，浓缩干燥，称重。

印楝叶乙酸乙酯层的细分-硅胶/凝胶色谱制备法

（1）A馏分的细分

① 取粗分后合并的第27～38份馏分，记为馏分A，重量为39g。利用薄层色谱摸索展开系统，最后确定洗脱系统为石油醚：二氯甲烷。

将200～300目的硅胶采用湿法装柱，湿法上样，装入90cm×9.5cmI.D.硅胶层析柱中，将馏分A以10:1的比例装入硅胶柱，并用石油醚、丙酮等有机溶剂的混合溶剂梯度洗脱，控制流出速度为5ml/min，以每50ml为一份收集洗脱液，并用薄层色谱检测收集到的洗脱液，点板，合并相同的馏分，用旋转蒸发仪在低于50℃的条件下真空蒸发溶剂，浓缩干燥，称重。

② 取经①柱层析后得到的馏分B,重量为2.39g。利用薄层色谱摸索展开系统，最后确定洗脱系统为石油醚：二氯甲烷。将200～300目的硅胶采用湿法装柱，湿法上样，装入80cm×6.5cmI.D.硅胶层析柱中，将馏分B以10:1的比例装入柱头，并用石油醚、二氯甲烷等有机溶剂的混合溶剂梯度洗脱，控制流出速度为5ml/min，以每50ml为一份收集洗脱液，并用薄层色谱检测收集到的洗脱液，点板，合并相同的馏分，用旋转蒸发仪在低于50℃的条件下真空蒸发溶剂，浓缩干燥，称重。根据点少量多的原则，选取合适的馏分，按照上述 ②的操作方法，用石油醚、丙酮的混合溶剂反复多次梯度洗脱C，最后未得到一定量的纯品，故浓缩干燥，放置。

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结论

本实验以印楝叶为研究对象，对其化学成分的提取分离纯化等进行了探索性研究，在经过多次试验的失败和总结，分离出一种有一定纯度的单体化合物，并进行了氢谱谱图鉴定。查阅其他文献最后确认其单体化合物为甾体化合物—β-谷甾醇。

建议：①印楝素是印楝中最具有杀虫活性的物质成分，若接下来的印楝叶的分离工作主要目标为分离出具有生物活性的印楝素，建议利用印楝素对照品测试出印楝素大约在哪些粗分馏分中，再确定继续细分的部分，减少时间成本。

②且在实验中若使用到水浴锅蒸发浓缩样品，应使水浴温度低于50℃,以免温度过高造成样品中对温度敏感的成分分解被破坏。

③在装柱子的过程中，若干法上样，采用一定量的硅胶装柱判断所需硅胶总量；若湿法上样，采用一定量的硅胶加适当溶剂混合判断所需硅胶总量，并记录.......