高效液相色谱法

有效成分的选择

查阅相关文献，在测定总黄酮含量时经常选用黄芩苷、槲皮素、芦丁等成分作为指标性成分。查阅六味药物的化学成分后，再进行薄层色谱鉴别甄选对照品，鉴别结果表明黄芩苷适合作为金雪祛痘凝胶高效液相色谱法测定总黄酮成分的指标成分，并且测定黄芩苷的技术和条件已经比较成熟。因而在本实验中，故以黄芩苷为指标，测定金雪祛痘凝胶中药提取液总黄酮的含量，以此来控制金雪祛痘凝胶的质量。

波长的选择

通过查阅众多文献，测定黄芩苷含量，常以278nm、280nm、315nm设为扫描波长，因本次进行测定的黄芩苷对照品的检验报告书所选用的检测波长为280nm，因此，确定波长为280nm进行扫描检测。

流动相的选择

在探索最佳色谱条件的实验中，参考并试验了2015年版《中国药典》中黄芩药材中黄芩苷含量测定的方法中的流动相甲醇∶水∶磷酸（47∶53∶0.2），还有文献中流动相为甲醇∶水∶磷酸（45∶55∶0.2），甲醇∶水∶冰醋酸（50∶50∶1），根据资料的显示，上述流动相的参考的出峰时间大约在12min至15min，但试验结果表明这些比例的流动相测定出来的出峰时间过长，结果均不理想。在实验结果基础上，发现采用甲醇∶水∶冰乙酸（60∶39∶1）洗脱，出峰时间为8min左右，而且黄芩苷分离完全，峰形好，塔板数达到要求，没有杂质干扰，因此，选择采用甲醇∶水∶冰乙酸（60∶39∶1）作为流动相进行洗脱。

出峰时间的差异分析

实验中，供试品之间的出峰时间有细微的差异。可能是由于流动相需要人工手动混合配制，且混合后的流动相需要经过砂芯漏斗装置过滤，过滤后需超声脱气20min~30min左右，才能进入高效液相色谱仪中。在配制过程中，量取体积不精准。而且在过滤和超声过程中流动相中甲醇容易挥发。又由于实验条件限制，不能保证一定的柱温，温度会对柱压有影响，从而影响出峰时间有差异。

小结

本次实验结果表明，采用本次实验的最佳色谱条件在高效液相色谱法测定金雪祛痘凝胶中药提取液的总黄酮含量（以黄芩苷为对照品）中，黄芩苷在0.0436~0.2180mg·mL-1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为101.50%（n=6），RSD=1.99%。且该法具有操作简便、重复性好、稳定性佳、精密度高的优势。HPLC法测得的结果准确、可靠，具有分析速度快、分离效率较高等的优点，能很好地分离出样品中黄芩苷，测得其含量，很好地控制了金雪祛痘凝胶中药提取液的质量。而且高效液相色谱法测定黄芩苷的条件较为成熟，方法简便，能节约成本。但本实验尚未探索金雪祛痘凝胶总黄酮含量测定方法，日后还有待研究改善。本实验的薄层色谱鉴别中，斑点显色清晰，阴性没有干扰，故本实验方法能作为鉴别金雪祛痘凝胶中黄芩、积雪草药材的依据。综上所述，本实验方法可以为拟定金雪祛痘凝胶质量标准提供参考依据。