目的 采用响应面分析法对鹿角蛋白酶解工艺进行优化，建立鹿角蛋白酶解条件，为鹿角蛋白的研究提供一定的参考。方法（1）以鹿角蛋白水解度和鹿角蛋白酶解液对超氧离子的清除率为指标，从酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶中筛选出酶解效果较好的两种酶进行双酶复合水解；（2）在单因素试验的基础上，以鹿角蛋白酶解液对超氧离子的清除率为指标，采用响应面分析法研究酶解pH、酶解温度和酶添加比对鹿角蛋白酶解液对超氧离子的清除率的影响。结果（1）鹿角蛋白水解度和鹿角蛋白酶解液对超氧离子的清除率的结果显示，风味蛋白酶和碱性蛋白酶的酶解效果较好，故用于进行复合酶解实验。（2）得到最佳酶解工艺条件：最佳酶解工艺为：酶解pH为7.50，酶解温度为53℃，酶添加比为7：3，即风味蛋白酶：碱性蛋白酶=7：3。在此条件下进行验证性试验，重复3次，得到清除率试验值为66.7%，与模型预测值67.4%基本相符。结论 通过响应面分析法优化酶解鹿角蛋白工艺条件简单可行，可用于鹿角蛋白酶解。

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本实验以鹿角蛋白冻干粉为原料，用酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶对鹿角蛋白进行酶解，以鹿角蛋白的水解度和鹿角蛋白酶解液对超氧离子的清除率为指标，选择酶解效果较好的2种酶，再通过单因素试验，分别进行响应面优化，确定双酶组合的最佳酶解工艺，得到鹿角蛋白高效酶解条件，为其高值化利用奠定基础。

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实验方法

酪氨酸标准曲线配制

精密量取各酪氨酸标准品溶液各lmL，加入0.55mol/L碳酸钠5mL，福林酚试剂1mL，于40℃水浴中显色15min，680nm波长处进行比色，测其吸光值。以吸光值（A）为纵坐标，酪氨酸浓度（X）为横坐标，制作标准曲线。

不同蛋白酶酶活力测定

取6只试管，编号1、2、3、4、5、6，其中1、2、3号试管各加入待测样品酶0.5mL，4、5、6号试管加入相应pH的0.02mol/L磷酸盐缓冲液0.5mL，于40℃水浴预热3min，再加入提前预热（40℃)的8mg/mL干酪素2mL，在40℃水浴中保温15min，取出并立即加入3mL10%的三氯乙酸，离心（2500rmp/min×3min），取上清液1mL，加入0.55mol/L碳酸钠5mL，福林试剂1mL，......

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鹿角蛋白酶解

蛋白质的水解度DH（Degree of hydrolysis）代表蛋白质在水解过程中，肽键被裂解的程度或百分比[14]。常见的蛋白质水解度的测定方法有三硝基苯磺酸法（TNBS）、甲醛固定法、茚三酮法、TCA法和pH-STAT法[15]。茚三酮法简单易行，所用的仪器、药品都比较简单，在一般的实验室中都可以实现。故本实验采用茚三酮法测定不同蛋白酶水解鹿角蛋白的水解度。

测定氨基酸中的-NH2基，茚三酮法是一种非常灵敏的方法。茚三酮与α-氨基酸一起在水溶液中加热，可发生反应生成蓝紫色物质[14]。但是一般配制成的显色剂稳定性较差，不能长时间贮存，须现配现用。另外，反应体系的pH要求为6.8左右，因此，在反应前，需将酶解液的pH调至6.8左右，否则，将影响测定实验......