讨论

稀释剂的选择

在对色谱条件进行建立与筛选之时，由于理论塔板数一直未达5000，未符合中国药典在该项下的要求,因而采用不同的稀释剂对原料药进行处理,探索其对色谱峰所产生的变化。

1.以纯化水作为溶剂，超声45 min，发现原料药在溶液中未能完全溶解，由此会导致野黄芩苷未能完全释放在溶液中，所测得的含量不准确，因而，不可以纯水作为溶剂。

2.以50％甲醇作为溶剂，超声45 min后，溶液底部发现没有原料药残留，但溶液呈浑浊状态，由于制备所得的浓度为0.1 mg/mL，理论上原料药是能在恰当的溶剂中完全溶解，因此，不可以50％甲醇作为溶剂。

3.先用50 ml甲醇对样品进行处理，超声45 min，发现溶液呈澄清状态，底部无残留，放冷至室温后，用水定容至刻度，摇匀，精密量取5 μl注入液相色谱仪，结果发现其对理论塔板数的提升并无太大影响，且放置24 h后，发现溶液内有析出现象。

色谱条件筛选实验中引发的思考

理论塔板数（N）可对色谱柱的分离效能进行评价，与柱子的填料、填充状况、柱长、粒径、流动相的组成、流速等有关。

在对色谱条件进行筛选实验中，由图1、图2、图3可知，色谱条件1、色谱条件2所记录的野黄芩苷主峰要明显比色谱条件3所记录的主峰峰形要好，但仪器中所记录的数据显示，只有色谱条件3中的理论塔板数达到了中国药典的.....

强降实验中的现象及思考

在对样品进行酸破坏时，往灯盏花素原料药加入5 ml 1 mol/L的盐酸时，发现溶液呈浑浊状态，放置24 h后，加入等量等浓度的氢氧化钠，混匀，使其充分中和，此时溶液里有絮状物质产生，加半量甲醇超声45 min，溶液呈澄清状态，无絮状物质。

而进行碱破坏时，尝试了以下条件：条件①：在1 mol/L氢氧化钠溶液中破坏24 h。发现野黄芩苷在给条件下完全降解；于是，尝试条件②：在0.1 mol/L氢氧化钠中破坏0.5 h；发现野黄芩苷在保留时间处仍未出峰；条件③：在0.1 mol/L氢氧化钠破坏5 min，其含量与未破坏样品相比较，降解了85％左右；条件④：在0.01 mol/L氢氧化钠中破坏5 min，此时满足破坏条件。在实验进行中发现，在条件①、②、③下，加入碱时，溶液呈澄清状态，加酸对其中和时候，溶液仍未澄清状态，而在条件④，加入碱进行破坏时，溶液澄清，加入等量等浓度的酸摇匀后，发现溶液中也有与酸破坏中相似的絮状物质生成。

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总结

本实验采用高效液相色谱法，建立流动相为乙腈：0.1％磷酸(15：85)；柱温38℃；流速：1.0 mL/min；进样量：5 μl；洗脱方式：等度洗脱的色谱条件，对3个批次的灯盏花素原料药中野黄芩苷的含量进行测定，测得含量分别为91.39％、92.12％、90.49％。

该方法具有操作简便、准确性高、重现性好、回收率高等优点，经方法学验证，专属性、线性系精密度、溶液稳定性等试验均通过，可用于灯盏花素原料药中黄酮类活性成分野黄芩苷的测定。