实验设计方案

在单因素实验的基础上选取温度、提取时间、氢氧化钠浓度、液料比为实验四个因素，进行L9（34）进行正交试验，以确定最佳提取工艺条件。在本试验中以苦荞麦总蛋白得率为指标，对苦荞麦总蛋白质提取工艺条件进行分析，每一水平重复三次。经过数据处理。分析正交试验结果，确定提取苦荞麦蛋白质的最佳工艺条件。

根据正交实验法设计的条件按液料比分别称取一定量的已脱脂的苦荞麦粉末于50ml锥形瓶中，再根据不同的浸提温度、提取时间、氢氧化钠浓度条件进行苦荞麦蛋白的提取实验，然后取出转移至离心管，于低速离心机3000rpm/min离心20min。用胶头滴管小心吸取1ml上清液于试管中，加入4ml配置好的双缩脲试剂，摇匀，放置30min后，于紫外分光光度计在540nm波长下平行测定吸光度3次，取平均值。最后根据牛血清蛋白标准曲线，分别求出的苦荞麦提取率。一共进行9组不同条件组合的实验，根据实验得出的结果进行计算分析，对比得出最优的提取工艺条件。

验证性试验

根据正交实验设计所得出最优的提取工艺条件，进行碱法提取。称取3份等量的脱脂苦荞麦粉末于已编号的50ml锥形瓶中，然后按照液料比添加一定浓度的氢氧化钠溶液在合适的温度下提取相应时间，取出转移至离心管，于低速离心机3000rpm/min离心20min。用胶头滴管小心吸取1ml上清液于试管中，加入4ml配置好的双缩脲试剂，摇匀，放置30min后，......

反应条件：温度40℃；时间20min；氢氧化钠浓度0.1mol/l,液料比对苦荞麦蛋白质提取的影响见图4-6。

如图4-6所示，实验的液料比控制在10:1至50:1之间，随着液料比的增加，所得蛋白质的提取率呈现先增加后减少的趋势，且在40:1时达到最大提取率。其中液料比在10:1至40:1之间蛋白质的提取率逐渐升高，液料比从40:1至50:1时蛋白质提取率反而开始降低，其中原因可能为苦荞麦中的蛋白质的溶出率在料液比等于40:1时已达到最高，即使增加溶剂，蛋白质的溶出量较少反而降低苦荞麦蛋白在溶液中的总体浓度，综合考虑选择液料比30:1、40:1和50:1作为较合适的液料比进行接下来的正交设计实验。

讨论

本实验采用的原材料是产自云南境内的苦荞麦，对原材料进行脱脂处理后，采用了碱法提取进行单因素试验以及正交设计试验优化苦荞麦蛋白质的提取工艺，再通过水解蛋白质确定出较合适的酶底比，荞麦蛋白经碱性蛋白酶水解后，可得到荞麦活性多肽。多肽是一种两性电解质，一定的肽链长度和一定的电荷密度时表现出一定的表面活性[13]。最后对苦荞麦多肽进行抗氧化活性研究。荞麦多肽具有较高的抗氧化性，能够清除体内的自由基，因此可以作为抗氧化剂添加到食品中，同时可以作为老年食品中的功能型成分，有着广泛的应用前景[14]。

在绘制标准曲线中，本实验绘制了牛血清白蛋白标准曲线以及酪蛋白磷酸肽标准曲线，其中牛血清白蛋白（BSA）的标准曲线回归方程为y=0.0445x+0.0035，R2=0.9995，酪蛋白磷酸肽（CPP）的标准曲线回归方程为y=0.0352x-0.0131，R2=0.9991，两曲线的R2值均较高，表明两条标准曲线都具有良好的线性关系。 

在单因素试验中，选择了温度、时间、液料比以及氢氧化钠浓度作为条件因素。其中温度最终选择的合适范围是50℃至70℃，因为在60℃时蛋白质提取率达到最高并逐渐开始降低，可能是由于温度过高导致部分蛋白质发生了变质，因此需控制好适当的提取温度，防止蛋白质在提取过程中被破坏。提取时间对蛋白质提取率的影响也是随着时间的增加，提取率先升高到一定程度再下降，原因是蛋白质在加热提取过程中会遭到损耗，当提取到饱和状态时随着损耗提取率就会逐渐下降。随着液料比的增加苦荞麦蛋白质提取率也是呈先增加后减少的趋势，其中原因可能为苦荞麦中的蛋白质的溶出率在料液比等于40:1时已达到最高，即使增加溶剂，蛋白质的溶出量较少反而降低苦荞麦蛋白在溶液中的总体浓度。