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多杀菌素60Co诱变高产菌株选育

[关键词:多杀菌素,高产菌株]  [热度 ]
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作品编号:zygc0287,word全文:22页,合计:8000

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多杀菌素60Co诱变高产菌株选育毕业设计论文------

目的:多杀菌素( Spinosad )是由放线菌刺糖多孢菌( Saccharopolyspora spinosa )发酵产生的大环内酯类抗生素。具有作用模式独特、自然分解快、对动物和昆虫天敌安全等优点,是一种应用前景广阔的新型生物农药。本文对多杀菌素刺糖多孢菌诱变处理来提高多杀菌素的产量。方法:采用物理诱变60Co诱变对S. spinosa出发菌株42号孢子进行诱变处理,并采用高效液相色谱仪(HPLC)分析检测多杀菌素有效成分含量。结论:通过4轮摇瓶复筛获得了1株比出发菌株产量高且稳定的菌株,其发酵产量相比对照菌提高11.14%。

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(一)研究意义

多杀菌素是一种新型、高效、安全的微生物源杀虫剂,不仅适用于田间农作物生产,还适用于粮食的产后储藏。目前多杀菌素被美国陶氏益农公司垄断,但其专利保护期于2009年12月到期,因此,诱变筛选多杀菌素高产突变株,优化高产菌株的发酵培养基,降低发酵成本,对多杀菌素在国内的产业化和推广应用具有重要意义。

(二)研究内容

本文主要通过60Co诱变育种方法,以刺糖多孢菌42号菌株作为出发菌株,进行诱变处理,以多杀菌素的发酵效价为指标进行筛选,以获得遗传稳定的高产突变株。

(三)实验材料

1.出发菌株

刺糖多孢菌42号菌株。菌株斜面培养7d。

2.培养基

(1)平板及斜面固体培养基

葡萄糖 3.2g、酵母提取物 4.5g、麦芽提取物 8.8g、碳酸钙 2.4g、琼脂17.0g、去离子水 1L,pH 7.00;

(2)基础种子培养基

TSB 37.0g、酵母提取物 3.6g、硫酸镁 1.2g、葡萄糖 13.0g、去离子水 1L,pH 7.00;

(3)基础发酵培养基

葡萄糖65.0g、糊精 55.0g、棉籽蛋白28.0g、碳酸钙3.2g、硫酸铵 1.2g、氯化钠 3.0g、硫酸铁 0.05g、磷酸氢二钾 1.00g、pH 7.00;以上培养基均 115℃、25min灭菌。

......

通过60Co诱变,经过4轮筛选得到一株产量相对高的菌株;73号菌株,73号菌株相对于出发菌株42号,多杀菌素产量提高11.14%。观察73号菌株的形态,基本上属于圆形草帽状。从这四批的实验结果可以看出,菌株在保藏初期单位很高,但是经过反复的冻融以后,产量有些下滑,但基本处于稳定。所以在得到高产菌株后应该立即封存冷冻。

 

 


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