多杀菌素是目前在全球范围内试现了商品化生产销售的最新生物农药品种之一。它是一种新颖的大环内酯类杀虫剂，具有对害虫高效、对环境安全、对哺乳动物低毒的优异特点。对鳞翅目害虫而言，多杀菌素是目前已发现的杀虫剂中选择性最高的化合物之一。

以绿色环保的新型生物农药取代目前大量使用的毒性较高的化学农药，已越来越受到重视，成为研究开发的热点。由于多杀菌素的优越性能，使其有望成为新一代杀虫杀瞒剂的重要品种，成为我国生物农药产业一个新的经济增长点。因此，该产品的开发具有很好的经济效益和社会效益。

多杀菌素独特的杀虫机理和对哺乳动物、鸟类和鱼类相对低毒等特性使其在市场上大受青睐。它的优秀特征包括:独特的化学结构和作用机制，对影响农业经济的多类害虫都有极高的活性，对鸟类、哺乳动物、鱼类甚至大多数天敌昆虫都有宽广的安全界限。多杀菌素作为又一个利用天然产物开发的新抗生素产品具有非凡的意义。

在国内，多杀菌素还仅仅停留在实验室研究阶段，市场上销售的多杀菌素产品全部为美国进口。多杀菌素的研究还需要加速推进。

本文主要研究目标是通过NTG诱变获得多杀菌素高产菌株，提高多杀菌素的摇瓶发酵水平。

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本文通过化学诱变NTG诱变选育获得多杀菌素产量提高的菌株，结论如下:

采用NTG诱变对S. spinosa出发菌株73号孢子进行诱变处理，利用高效液相色谱方法检测多杀菌素的发酵产量，通过生测初筛和摇瓶复筛选出26株比出发菌株产量高的菌株进行复筛验证。其中产量最高提高16.06%，最少提高0.23%。

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多杀菌素是一种新型的微生物源杀虫剂抗生素。由于多杀菌素兼具生物农药的安全性和化学合成的速效性特点，在农业生产和粮食储藏中具有良好的应用价值和广阔的市场前景。多杀菌素的商业化生产一直被陶氏益农公司所垄断，我国对多杀菌素的研究起步较晚，目前还局限在实验室小试阶段。因此，选育高产菌株以及优化发酵工艺，提高多杀菌素的发酵单位，对我国实现多杀菌素的产业化十分有必要。

本文主要通过NTG诱变育种方法，以刺糖多孢菌经Co60 诱变后复筛结果高产稳定的73号和51号菌株作为出发菌株，进行诱变处理，以多杀菌素的发酵效价为指标进行筛选，以获得遗传稳定的高产突变株。

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初筛

（a）用移液工作站将灭菌的种子培养基分装到无菌的96孔板中，每孔分装400μL培养基。

（b）分别从不同诱变剂量的平板中挑取单菌落至96孔板中，每个板A1、A6、A12、B1、B6、B12为对照菌孔（诱变剂量在96孔板中分布：种子板1:5min，种子板2:10min，种子板3:20min，种子板4：30min，种子板5:40min，种子板6：50min，种子板7：60min，种子板8：A1-D12[40min]、E1-H12[50min]，种子板9：A1-D12[20min]、E1-H12[30min]，种子板10：A1-D12[50min]、E1-H12[10min]），摇床培养过程中控制摇床相对湿度85%、温度为29℃、转速 280rpm，培养3天后转接发酵板，。

（c）用移液工作站将灭菌的发酵培养基分装到无菌的96孔板中，每孔分装400μL培养基，将培养好的种子对应移种至发酵培养基中，每孔移种60μL种子。同时将剩余的种子按1:1加入400μL40%的甘油，震荡混匀，用无菌硅胶板密封后-80℃保种。然后将接种的96孔发酵板在29℃280rpm摇床在相对湿度85%发酵培养7天。

（d）取发酵7天的96孔发酵板，使用移液工作站在每孔中加入800μL甲醇后，用硅胶板密封，静置过夜后3500rpm离心20min。从对......