课题的目的

本课题的目的是通过实验选择出能最大限度提高多杀菌素产量的培养基配方

课题的要求

1、了解多杀菌素的相关知识，包括其结构、化学性质及诱变、发酵方法

2、掌握多杀菌素的诱变流程，并研究如何改变环境以获得最高产的多杀菌素菌株

3、熟练操作微生物发酵罐，从而做好罐上放大试验

3、课题思路与预期成果

通过改变碳源、氮源的量来选择出最佳用量，并将这个最有配方进行正交试验，在发酵罐上进行检验，选择出能用于工业大规模生产的最佳培养基配方。进过改变加料量和正交试验后得出的配方能将多杀菌素的产量提高30%左右。

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通过发酵培养基优化，筛选出能提高多杀菌素产量的合理配方，并且进行了发酵罐放大培养。主要方法与结果如下：

1、单因素试验考察了碳、氮源对多杀菌素合成的影响，并使用正交试验法获得了较佳配方。

2、以摇瓶发酵试验为基础，进行了30.00L、50.00L发酵罐放大培养。

3、培养基优化后，多杀菌素发酵单位与对照相比提高了32.00%，达到608.16 μg/mL。发酵罐上的多杀菌素单位为125.00μg/mL，产量较摇瓶发酵低。

得出以下结论:

1、通过对碳源、氮源的优化，多杀菌素的产量会有提高，所以优化是有必要的。对碳源、氮源的用量可以进行更加精确的优化，从而最大限度的提高多杀菌素的产量。

2、本文只是对部分因素做了优化，此培养基中其他因素对多杀菌素的产量是否有影响有待进一步研究。

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菌种选育

我们在进行菌株选育的过程中主要运用了三种方法[12]:自然选育，诱变育种和推理选育。通过自然选育往往能筛选到生产能力有一定提高的菌株，同时也可以考察菌株的传代稳定性;诱变育种中主要使用的诱变剂有化学诱变剂NTG和物理诱变剂紫外线两种;推理选育则是在诱变的基础上，根据多杀菌素的生物合成途径和代谢调节机理代谢，采用适合的抗性平板进行筛选。

菌种保藏

在实验工作中主要采用了以下三种保存菌种的方法[13]:

1.斜面低温保存法:菌种斜面培养基上培养成熟后，移入4℃-6℃的低温下保藏。这是抗生素生产上常用的菌种保存方法，但是保存时间相对较短，一般为2-3个月然后转接。而对于S.spinosa来说保存时间仅为l-2周，所以我们一般不采用斜面低温保存的方法来保存菌种，而通常都使用新鲜的斜面。

2.甘油管保存法:包括抱子悬液甘油管和种子液甘油管两种保存方法。用20%的甘油将抱子悬液或种子培养液冷冻于-20℃以下的低温冰箱内保存。这种方法的优点是简单、快捷、便于操作、对实验设备要求低。菌种保存时间一般为半年左右，是我们在实验工作中最常用的菌种保存方法。

3.冷冻干燥保存法(又称冻干法):选用脱脂牛奶作为保护剂，以适当的方式灭菌制成。将生长成熟的斜面加入适量的保护剂制成菌悬液，菌悬液中所含的细胞数目以108-10 /ml为宜，装量不超过安瓶管球部的一半，然后冷冻，抽真空，封口，最后置于低温冰箱中冷冻保存。这种方法的优点是菌种密封于......