目的 观察双氢青蒿素(dihydroartemsinin，DHA)对人肺腺癌细胞 A549 增殖的影响以及 DHA 发挥作用的具体机制。方法 选取对数生长期的 A549 细胞，设置对照组和 DHA 药物组。各组细胞按照常规培养后，采用四唑氮蓝(MTT)法测定 4 组浓度的DHA 对 A549 细胞增殖的抑制作用；实时定量 PCR（RT-PCR）检测细胞中 p85、Akt、Bax、Bcl-2 的基因表达；免疫蛋白印迹法（Western blotting，WB）检测细胞中 p-p85、p85、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2 蛋白的变化；根据 Caspase3 活性试剂盒检测 Caspase3 活性。结果 MTT  法检测成果表明，DHA 可显著抑制 A549 细胞的增殖(P<0.01)； RT-PCR 检测结果表明，DHA 能明显减弱 Bcl-2 mRNA 的表达(P<0.05)，增强 Bax mRNA 的表达(P<0.001) ， p85 、Akt mRNA 的表达水平差异则没有统计学意义(P>0.05)；从 Caspase3 活性检测结果可知，DHA 可明显增加 Caspase3 凋亡活性(P<0.001)；同时 WB 检测结果也可看出 DHA 能明显减少 p-p85、p-Akt、Bcl-2 蛋白的表达(P<0.01)，增强 Bax 蛋白的表达 (P<0.01)，而 p85 和 Akt 表达则没有明显的改变(P>0.05)。讨论 DHA 可以阻止 PI3K/Akt 信号通道的激活，从而减弱 A549 的增殖程度及促进 A549 的凋亡。

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本论文正是以人肺腺癌细胞 A549 为研究对象，通过四唑氮蓝(MTT)法测定不同浓度的 DHA 对 A549 细胞增殖的抑制影响、实时定量 PCR（RT-PCR）检测 p85、Akt、Bax、Bcl-2 的基因表达、免疫蛋白印迹法（Western blotting，WB）检测 p-p85、p85、p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2 蛋白的变化、根据 Caspase3 活性试剂盒检测 Caspase3 活性， 进而观察 DHA 的抗肿瘤作用和作用机理，弥补现阶段 DHA 在肺癌治疗领域的不足。

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讨论

肺癌是我国主要的恶性肿瘤之一， 它的恶性程度极高， 预后差，5 年生存率

<5%， 肺癌目前已成为各种癌症中导致死亡的首要原因[7,8]。传统的抗肿瘤药物，其毒副作用比较高，从而导致肺癌的复发、远处转移等难题不能得到解决，因此，在天然药物中筛选疗效好且毒性小的抗肿瘤药物成为研究热点。

肿瘤细胞的侵袭转移与Bcl-2、Bax 的关系

Bcl-2 （B-cell lymphoma-2），是 B 淋巴细胞瘤-2 基因的简称。可以分为 2 类， 分别是有阻碍凋亡的抗凋亡蛋白(如 Bcl-2)和有促进凋亡的促凋亡蛋白(如 Bax)，两者的比例可决定细胞对死亡信号的反应[10,11]。Bcl-2 能够阻碍细胞色素 C(cytochrome c， Cyt c)的释放，使得超氧阴离子的产生受到了阻碍。另外，Bcl-2 族的蛋白能形成同源或异源二聚体，而既定的二聚体则是信号通道上使细胞凋亡的分子阀。当细胞接收到凋亡指示后，Bax 和 Bak 则产生寡聚化，由胞质转移至线粒体外膜上，再与外膜上有电压依赖性的阴离子通道相作用使其打开，最终使线粒体内的凋亡因子（如 Cyt c） 释放到胞质基质中，造成细胞死亡。以游离或与蛋白质镶嵌的方式存活于活细胞胞浆中的 Bax，在凋亡信号的调节下，可被转移至线粒体外膜上，其产生的二聚体......