不同药品微生物限度检测法

盐酸克林霉素微生物限度检查：首先是供试品溶液的配置：精确称取10g盐酸克林霉素样品，于稀释液（pH7.0的氯化钠蛋白胨缓冲液）中溶解，并稀释至100ml，充分振摇均匀，即为供试品溶液。

配置好供试品便可以进行微生物限度检查了，其具体检查项目及操作如下：

需氧菌总数：在无菌滤器中，用移液管吸取10ml供试品，缓慢加入，同时用过滤器进行过滤，再用100ml的无菌pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，进行淋洗滤膜，需冲洗八次，冲洗完毕取出滤膜，菌面朝上贴于在事先准备好的无菌TSA平板表面，用于需氧菌计数。在隔水式培养箱中倒置TSA培养基，在30℃~35℃中培养3~5天，培养结束后进行计数，需平行检测。

霉菌及酵母菌：在无菌滤器中，加入10ml用移液管吸取的供试品，进行抽滤，同样需要用100mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液，进行充分淋洗8次，取出滤膜，菌面朝上贴于事先制备好的SDA平板表面，用于霉菌和酵母菌计数。霉菌培养箱中倒置SDA培养基，在20℃~25℃中培养5~7天，培养结束后进行计数，需平行检测。

大肠埃希菌：培养结束后，震摇容器，在100ml麦康凯肉汤培养基中，加入1mlTSB培养液，在42~44℃中培养24~48小时。然后在麦康凯琼脂培养基平板上进行划线[6]。划线完倒置在30~35℃下培养18~72小时[7]。观察菌落外观[8]。

说明：若平板生长出红色，非粘液型菌落，则表示样品中存在大肠埃希菌，需用合适的生物化学鉴定试验加以确认。如果生物化学鉴定试验结果呈阴性或平板中未见此类菌落生长，则表明产品符合规定。

甲砜霉素微生物限度检查：供试品制备：在无菌的100ml的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，加入精密秤取的甲砜霉素10g，振摇使药品混合均匀，将上述溶液置于离心管中，于500r/min离心3min；取离心后的上清液，做1:10的供试液。

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药品微生物限度检查法验证

为了使微生物限度检查法更加完整、科学和严谨，《中国药典》规定：在建立供试品的微生物限度检查法或检查法的检验条件发生改变可能影响检查结果时，应对检查法的可靠性进行方法验证。根据产品的性质，合理地进行实验，并对实验结果进行三次实验，以减少误差，使实验结果更加准确。包括菌落计数法确认、菌液制备、计算回收率、实验方法等，然后回收率在0.7以上。微生物的限制是很麻烦的，许多因素都会导致测试结果的误差。其中包括有：操作环境的影响、培养基的影响、设备及用具的影响、菌落计数误差、供试液制备过程影响等，所以对限度检查方法进行验证是非常重要的。

试验具体操作如下：首先需用0.9%的氯化钠溶液稀释菌种制作菌液，包括有金菌、铜绿、枯草、白念。根据中国药典规定，需进行菌数测定验证和控制菌检查验证，需要进行五组平行试验开测定菌数。结果表明，该控制群的活菌群和4种样本群的存活结果均为5次试验的平均回收率，通过对三种细菌的计数，得出平均细菌回收率，白色念珠菌的回收率为霉菌的回收率，在5个平行试验中进行了控制细菌试验。若采用常规的方法无法检出控制菌，则采用药典提供的4种前处理方法。进行供试液的前处理，再重做验证试验[18]。

药品微生物限度检查法中的问题及其改进建议

药品微生物限度检查操作繁琐，过程复杂，中间很多步骤都会存在错误或者污染。现在就可能对药品微生物限度检查造成影响的因素进行分析和......