丹参（Salvia miltiorrhiza bunge）系唇形科（Labiatae）鼠尾草属（Salvia）植物， 多生长于安徽、江苏等地，丹参的干燥根及根茎，是中国的传统药材，具有广泛的药 理活性和良好的临床应用前景。经数十年的研究，无论是在物质基础方面还是在药理 活性方面，都对此药材进行了较为深入的研究。由于目前开发的分离纯化方法主要是 针对丹参中含量较高的化合物，在丹参的分离方面，仍缺乏系统的分离分析方法，因 此有必要发展丹参的系统分离方法。

在本文中，丹参提取物通过固相萃取（SPE）分离成中等极性部分和弱极性部分， 随后针对两部分样品，基于反相色谱固定相和亲水作用色谱固定相的评价结果，选择 了合适的固定相，建立了丹参的双重二维正交分离方法，即分离中等极性部分的HILIC×RPLC体系和分离弱极性部分的RPLC×RPLC体系，并对其中的酚酸类成分  和二萜类成分进行了质谱鉴定。

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基于色谱柱的选择性发展丹参的二维正交分离体系

二维反相液相色谱×反相液相色谱（2D-RPLC×RPLC）是常用的二维分离体系 之一，其每维的色谱峰容量都较大，具有很好的重复性及与质谱有很好的兼容性，其 分离能力在很大程度上取决于二维固定相选择性的差异[22-24]。由于传统的C18柱具有 较高的相似性，新型反相固定相被用于2D-RPLC×RPLC高正交体系的建立。

亲水作用液相色谱（HILIC）是分离极性化合物的一种有效分离技术[25]，由于其 保留机理与反相液相色谱不同，提供了与反相液相色谱互补的选择性，这有助于建立 高正交的二维分离体系。 基于XTerra C18 和Click β-CD 色谱固定相， 建立2D-HILIC×RPLC体系，用于分离中药的极性和中等极性成分[22]。

小结

基于上述对于丹参分离方法的探究，本论文的主要研究内容为：丹参提取物通过 固定相萃取（SPE）分离成中等极性部分和弱极性部分，随后针对两部分样品的性质 差异发展了双二维分离体系，即分离中等极性部分的HILIC×RPLC体系和分离弱极 性部分的RPLC×RPLC体系，同时对两部分样品中的化学成分进行了质谱鉴定。

实验部分

试剂与仪器

色谱级的乙腈和甲醇购于 Merck（Darmstadt，Germany），甲醇购于 Acros（Fair Lawn，NJ，USA）。实验用水来自 Milli-Q 纯化系统（Billerica，MA，USA）。实验仪器为 Waters Alliance 高效液相色谱仪，包括 2695 四元梯度泵、自动进样器、柱恒温系统、2489 型紫外-可见双波长检测器和 Empower 色谱工作站。使用的色谱柱包括购自 Waters（Milford，MA，USA）的 XTerra C18、Atlantis T3 和 Atlantis HILIC Silica， 购自 Acchrom（北京，中国）的 XAqua C18、XAqua CN、XAmide 和 Unitary NH2 及Tosoh Biosciences（上海，中国）的 TSKgel Amide-80、Merck SeQuant（Darmstadt， Germany）的 ZIC-HILIC 与自制的 Click OEG、Click TE-CD 和Click TE-Cys。所有的色谱柱规格均为 150 mm×4.6 mm，5 μm。

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丹参提取物的 SPE 分段

由于中药的化学成分非常复杂，通过预处理的方法降低样品的复杂性是十分必要 的。丹参总提物在 XCharge C18 上的分离图见图 3.1A。根据化合物在色谱柱上的保留，其化学成分主要包括中等极性部分和弱极性部分。通过 SPE 处理，可将总提物分成两部分——ACN/H2O（50:50，v/v）（含 0.5%FA）洗脱得到中等极性的部分样品 1 和 ACN/H2O（90:10，v/v）（含 0.5%FA）洗脱得到弱极性的部分样品 2，这两部分样品对应的分离图见图 3.1B 和 3.1C。由于中等极性成分在反相色谱模式和亲水色谱模式下都有较好的保留，同时这两种模式具有互补的选择性，因此设计了 HILIC× RPLC 的二维分离体系分离中等极性的部分样品 1。而弱极性的部分只在反相模式下被保留，因此设计了 RPLC ×RPLC 的二维分离体系分离弱极性的......