本次实验内容是将 β-榄香烯与 5-FU 联合应用，处理 MCF-7 乳腺癌细胞，希望可以通过这两个药物的联合应用达到比单独用药更好的治疗效果，在达到更好的治疗效果的同时，其严重的不良反应也大大减少，更安全有效的引用于临床，但是通过 MTT 实验发现，5-FU 单独作用于MCF-7 乳腺癌细胞时，抑制效果明显；而 β-榄香虽具有诱导细胞凋亡的作用，但这并不与药物浓度成简单的直线相关关系；当联合作用时，其联合抑制效果不如 5-FU 单独作用。因此证明，本实验的结果是 β-榄香烯无法提高 MCF-7 乳腺癌细胞对 5-FU 的敏感性，没有期待的联合作用效果。

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细胞复苏

细胞复苏时，融化过程需快速进行，以减小对细胞造成的损伤。因此实验前需先调好恒温水浴锅的温度，一般约 37℃。从-80℃冰箱中取出装有 MCF-7 乳腺癌细胞系的冻存管，然后将其迅速放入 37℃恒温水浴锅中，不断摇晃使冻存管内液体快速融化，之后放入超净工作台待用。然后轻轻吹打冻存管内的细胞，制备细胞悬液，将其转移到含有培养基的培养瓶中，轻摇使培养液铺满瓶底。最后需要将细胞培养瓶置于 37℃，5%CO2 培养箱中培养 24h，待细胞贴壁后换液继续培养。 

细胞培养

用含有 10%胎牛血清的 RPMI 1640 培养液培养 MCF-7 细胞，温度为 37℃,CO2 浓度为 5%，注意将细胞放入细胞培养箱时旋松瓶盖，避免对细胞的损伤。根据细胞生长速度，约 2-3 天更换新鲜培养基。

细胞传代

当细胞培养瓶里细胞的生长量达到 75％时需进行细胞传代，事先做好传代前准备工作，培养液要预热、超净工作台需用酒精擦拭等。注意从细胞培养箱取出细胞培养瓶时，要把培养瓶的瓶盖旋紧。用酒精灭菌后放到超净工作台中，把培养瓶中的旧培养基倒掉，用灭菌后的 PBS 清洗 3 次，每次 3-5ml，倒尽 PBS 后，用胰酶进行消化（100ml 的细胞培养瓶加入 1mL 胰酶，其它规格的培养瓶视情况而定，但是要保证细胞能完全被浸没），轻轻晃动，让胰酶消化液把培养瓶的瓶底铺满，消化约 3-5min， 然后加入含胎牛血清的新鲜培养基 1ml 终止胰酶的消化。使用吸管，吹打分散细胞， 如果观察到仍有大量细胞未脱落可反复吹吸，将瓶壁上的细胞吹下，让它溶在细胞培养液中制成细胞悬液，再将其全部吸入到离心管中，室温下调节转速 1000rpm，离心5分钟后弃掉上清液，最后加入新鲜的完全培养基，用吸管把.......

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本次研究探讨了β-榄香烯与5－FU的联合应用是否对MCF-7乳腺癌细胞有治疗效果，现报告如下：

β-榄香烯具有诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、抗肿瘤转移和主动免疫保护等直接和间接的抗肿瘤作用，还有抗氧化、抗菌、抗病毒、改善循环等作用，因其光谱、安全、有效、价廉等突出优点而具有良好的应用前景。而5-FU类药物作为肿瘤化疗的基础药物用于临床，但由于其具有毒性反应，因此联合治疗是将这两个药物利用率增大的最优先的选择。

本实验选用不同浓度梯度的β-榄香烯单独处理MCF-7乳腺癌细胞，抑制效果不够理想，而且浓度与抑制效果不成简单的线性关系，此次实验重复做了两次，大大......