本实验主要是探究倍半萜类小分子天然化合物α-蛇麻烯对 MCF-7 乳腺癌细胞的抑制作用。通过 MTT 实验发现α-蛇麻烯的用量超过 500ug/mL 时才有抑制作用。再经 DAPI 染色实验观察细胞形态学变化，发现用 100ug/mL、200ug/mL、400ug/mL、800ug/mL 的α-蛇麻烯处理细胞后，大多数细胞会出现不同程度的凋亡现象，说明这种化合物能促进 MCF-7 乳腺癌细胞的凋亡。经过流式细胞术的检测同样可以发现用不同浓度的药物处理后，随着药量的增加细胞凋亡率上升。因此证明α-蛇麻烯对人乳腺癌细胞MCF-7 有抑制作用，并且这种作用诱导细胞凋亡有关。又因为其有广泛的植物资源来源，本身是易挥发的油状物易于提取分离，分子质量较小相较其他大分子化合物更容易穿透细胞膜抵达病灶等优点。因此，α-蛇麻烯可能成为有待于开发的新型抗癌药物。

......

本论文通过细胞实验常用的 MTT 实验（MTT 比色法）测定药物的细胞毒活性强弱、再用 DAPI 双染法进行细胞核染色、流式细胞仪检测细胞凋亡状况。整个过程就是为了探究 α-蛇麻烯对 MCF-7 的作用效果强弱，进而判断其是否有继续研究的价值。

......

细胞复苏

复苏细胞时，在37℃水浴条件下迅速融化冻存的细胞，以减小对细胞造成的损伤， 提高细胞存活率。所以实验前先调好恒温水浴锅的温度为37℃。从-80℃冰箱中取出装有人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的冻存管，迅速将其放入37℃恒温水浴锅中，不断摇晃冻存管使其内液体迅速融化，将冻存管放入超净工作台待用。轻轻吹打冻存管内的细胞液，使细胞液混合均匀，将其转移到含有培养基的培养瓶中，轻摇使培养液铺满瓶底。最后将细胞培养瓶置于37℃，5%CO2培养箱中培养24h，使细胞贴壁后继续换液培养。

细胞培养

用含有 90mLRPMI1640 培养液、10mL 胎牛血清和 1mL 双抗的培养基，37℃、5%CO2、湿度为 80-100%的条件下培养 MCF-7 细胞，注意将细胞放入细胞培养箱时要旋松培养瓶的盖。根据细胞生长速度，约 2~3 天更换新鲜培养基。

细胞传代

当细胞培养瓶里细胞的生长量达到75％以上时需进行细胞传代，事先做好传代前准备工作，如 ：将培养液放置在37℃的水浴锅中预热5min、超净工作台用紫外光照射30min后用酒精擦拭等。从细胞培养箱取出细胞培养瓶时，要把培养瓶的瓶盖旋紧以免染菌。用70%酒精将培养瓶灭菌后放到超净工作台中，首先把培养瓶中的旧培养基倒掉，再用灭菌后的PBS清洗3次以除去死细胞，每次需PBS液3-5mL。倒尽PBS后， 用胰酶进行消化（100mL的细胞培养瓶加入1mL胰酶，其它规格的培养瓶据其具体体积而定，但是要保证培养瓶底部的细胞能完全被浸没），轻轻晃动培养瓶5min，让胰酶消化液把培养瓶的瓶底铺满，弃去胰蛋白酶液.......