目的：探讨并验证CRISPR-Cas9敲除胶质母细胞瘤细胞IDH1基因。方法：通过生物信息网站设计IDH1基因gRNA的序列，利用PCR将基因克隆到慢病毒载体上，每个连接产物挑取5个单克隆抗体送公司测序。将测序正确的质粒转染293T细胞，收集病毒上清液感染胶质母瘤细胞U87MG细胞系，利用嘌呤霉素进行筛选，以此来检测CRISPR-IDH1的敲除效率，为后期研究IDH1基因在人胶质母细胞瘤中的作用提供基础。结果：1.成功构建慢病毒LentiCRISPRV2-IDH1质粒；2.利用慢病毒LentiCRISPRV2-IDH1成功建立稳定转染的U87MG细胞系；3.利用PCR和western blot检测证实LentiCRISPRV2-IDH1在U87MG细胞对IDH1敲除效果。结论：运用CRISPR技术成功敲除人胶质母瘤细胞中的IDH1基因。

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同源重组是传统的基因编辑手段，具体表现在通过靶向定位技术插入外来基因。而我们研究的CRISPR/Cas技术使利用了目的基因与gRNA特异性结合，并且形成双链后Cas9蛋白能够对双链进行切割从而达到对基因片段的敲除。运用同源重组原理诱导产生错误性双链修复，具体表现在引导非同源性末端错误的切割修复，同时在修复过程中会有基因片段的插入和缺失，所以与特点位点同源的Cas9以及gRNA是进行基因敲除必不可少的两个部分。

因为该系统的简单方便和实验过程用到的时间短等特点，迅速取代前两代的基因编辑技术[16]。所以目前针对此技术的研究发展的非常迅速。

讨论

目前关于胶质瘤与IDH1基因的关系在世界范围内有很多科学家在研究，但就目前的研究情况来看关于胶质瘤的治疗并没有很好的治疗手段。因为胶质瘤的发病因素是多方面的，但是随着科技的发展使得学者和医生可以从多方面来研究胶质瘤。据有研究报道IDH1基因与信号通路的蛋白表达存在相当关系。

经典信号通路PI3K-AKT被发现与肿瘤细胞的增殖存在关联[17]。此信号通路一旦被激活即可影响肿瘤细胞，让肿瘤细胞的耐药性增强。同时又发现IDH1基因的抑制与PI3K-AKT的通道是否激活也存在关联，因此可以朝:IDH1的敲除是否能够抑制肿瘤细胞的增殖并以此来治疗胶质母细胞瘤，这个方向来研究。目前关于胶质母细胞瘤的治疗手段只有放疗；化疗；手术切除，并且因为胶质瘤是浸润性生长于正常细胞难以难以分离，所以手术切除病灶的效果并不是很好，并且使用化疗和放疗等手段对病人的伤害以及对病人造成的心理负担和经济负担也相当沉重，所以研发基因治疗手段将大有可为。因为使用基因技术治疗能够靶向定点基因片段，然后通过加入或者敲除DNA片段来使目的基因表或沉默。但是目前研究显示基因治疗是新型治疗手段，临床应用没有传统医学的比重高，然而目前兴起的CRISPR/Cas9基因编辑技术，编辑效率比前两代有显著提升，并且方便快捷研究成本比前两代降低很多，因此在治疗成本上就可以降低患者的负担，利用CRISPR治疗胶质母细胞瘤细胞是很有前景的。