目的：探究CRISPR-Cas9敲除IDH1基因对人胶质母细胞瘤细胞增殖与侵袭的影响。方法：构建慢病毒表达CRISPR-IDH1基因，感染人胶质母细胞瘤U87MG细胞后，利用四唑盐(MTT)比色方法测定胶质瘤细胞的增殖情况，用划痕实验的方法检测细胞的侵袭能力。结果：利用CRISPR-Cas9方法敲除IDH1基因后对人胶质母细胞瘤细胞的增殖和侵袭有促进作用。

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细胞培养

细胞复苏：从液氮罐将U87MG细胞准确、迅速取出，用镊子夹住冻存管立即投入42 ℃的水浴中，快速轻摇使其受热均匀，直至其融化。当其完全融化后，将其取出，表面喷75%酒精擦拭后放入超净台，将细胞吸入含10%血清的培养瓶中，分别接种到培养皿上，十字摇匀，放置于37℃培养箱中培养。约30 min后细胞贴壁完成，后给细胞换液。

细胞传代：30 min紫光灯照射超净台后，把胰酶液、PBS、六孔板放入超净台，用0.125%胰酶 1 ml消化30 s后，加培养液终止消化，取液放入EP管1000 r离心3 min。将离心后的EP管取出，弃上清，将1105细胞液滴于六孔板，十字摇匀, 放于37℃培养箱培养。定期使用显微镜观察细胞状态，及时更换培养液。

细胞转染

配置LB溶液100 ml(未加琼脂)，LB凝胶100 ml（加琼脂），准备高压过的枪头、EP管、玻璃平皿、离心管等。配置LB琼脂平板，超净台照紫外30 min后将烤干的平皿放于超净台内。在加热融化的LB凝胶中加入抗生素（温度降至60 ℃，手能耐热——感觉不到烫时，再加抗生素，防止抗生素高温失效）。抗生素加入后立即与融化的LB凝胶混匀，混匀后倒入平皿，厚度均匀，置于超净台待凝，放于一旁。取冰盒准备实验。

细胞转化：分别从冰箱中取出CRISPR-IDH1质粒、大肠杆菌感受态置于冰上溶解。在超净台内取6个经高压的EP管，标记时间及质粒名称，各加0.1 ml大肠杆菌感受态，再每管加0.5 μl质粒，混匀后置于冰上冰敷20 min。提前打开水浴锅，加热至42 ℃，冰敷时间到后将EP管转置42 ℃水浴锅中1.5 min。取出水浴锅后各管加入0.8 ml不含抗生素的LB培养基，37 ℃温育60 min。温育后，将6个EP管3000 r离心3 min，使细菌沉淀，弃去大部分上清，留约50 μl。用枪头吹打混匀 滴加到含抗生素的LB琼脂平板，用无菌三角铁棒均......

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