制药工程文献翻译——摘要：

背景:猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）已被公认为是一个影响猪最重要的药物。清道夫受体 CD163 是一种重要的输入介质为 PRRSV。

结果：TD4 和 TD5 CD163 基因进行扩增，并对扩增产物进行克隆到 pET-28a（+）（分别的指定 pet-28a-td4 和 pet-28a-td5）。然后质粒 pet-28a-td4 和 pet-28a-td5 转化为大肠杆菌 BL21（DE3）应变和通过加入 1 mmol/L 的异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)进行表达。该蛋白的高表达在上清液从 TD4 和 TD5 上生产，结合含有下列化合物的缓冲液培养细胞：β-巯基乙醇，尿素，吐温 20，甘油，和 SDS，而他们很少从 TD4 和 TD5 生产上表达上清，结合缓冲液没有化合物培养细胞。 TD4 和 TD5 蛋白进行纯化，和BALB/c 小鼠用纯化的蛋白免疫。Western 印迹分析表明，TD4 和TD5 蛋白能够与TD5抗体反应；TD4 和 TD5 抗血清滴度为 1:160 反对 TD5 蛋白，酶联免疫吸附法显示。结论：这些研究为包涵体和相应的抗体制备表达蛋白质纯化的一种新方法。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒;CD163 ;蛋白纯化;化合物。

1 背景

繁殖与呼吸综合征（PRRS）是对养猪业的最重要的威胁，因为它在 1987 年的美

国被首次确认[1]，然后 1990 年在欧洲[2]，最后 1995 年在中国[3]被确认。猪繁殖与呼吸综合征的临床表现为妊娠母猪严重繁殖障碍，包括分娩死产和早期与晚期流产，仔猪和成年猪呼吸窘迫，以及在成年猪中的流感样疾病。自 2006 以来，高致病性猪蓝耳病病毒（PRRSV）已经出现在中国的一些养猪场[4，5]，其特点是所有年龄段的猪高烧和死亡比例很高。

多种细胞因子参与 PRRSV 结合和内在化研究，包括唾液酸粘附素[6，7]，肝素[8， 9]，波形蛋白[10]、清道夫受体 CD163[11，12]，和非肌性肌球蛋白重链 A[13]。CD163，一种细胞外蛋白，由一个信号肽，九个富含半胱氨酸的清道夫受体（SRCR）串联重复序列编号为 1-9，跨膜（TM）区域，与细胞内的胞质尾（图 1A）组成(Figure 1a)。为

了了解富含半胱氨酸的清道夫受体在 CD163 作用，原核表达、蛋白纯化，并进行对受体 CD163 细胞外结构域片段抗体的制备。

......

（a）CD163 的结构域组织由 9 个胞外富含半胱氨酸的清道夫受体（SRCR）结构区域，2 个脯氨酸丝氨酸苏氨酸（PST）丰富的区域，一个跨膜区（TM），和胞质尾。

（b）CD163 缺失突变体组织的区域：为 TD4 突变体，4 个胞外富含半胱氨酸的清道夫受体区域，跨膜区域，和野生型 CD163 缺失的细胞质区域。对于 TD5 突变体，5 个胞外富含半胱氨酸的清道夫受体区域，TM 跨膜域，和野生型 CD163 缺失的细胞质区域。

2.材料与方法

2.1菌株，载体和主要试剂

在这项研究中，我们使用的是被保存在作者的实验室中的大肠杆菌菌株 DH5α 和BL21 （ DE3 ） ， 表 达 载 体 pET-28a （ + ） ， 质 粒 pcDNA3.1-CD163-D4 和pcDNA3.1-CD163-D5，Platinum pfx DNA 聚合酶购自 Invitrogen。限制性内切酶，DNA 标记，与异丙基-β-D-硫代半乳糖（IPTG）均购自 TaKaRa。T4 DNA 连接酶和蛋白质分子量标记均购自 Fermentas。质粒抽提试剂盒和凝胶提取试剂盒均购自欧米茄。Ni sepharos 6 快速流动购自 GE 公司。

2.2CD163 TD4 和 CD163 TD5 基因的 PCR 扩增

基于 CD163 序列，对 CD163 TD4 和 CD163 TD5 基因的扩增引物，利用生物软件 Oligo v 6  和由 Invitrogen 公司研究（图 1）。正向引物是 5’-TATGAAGCTTg cATGAGCAAACTCAGAATGGTG-3' ， 反 向 引 物 是5’-TGTACTCGAGTGTGGCTTTTTGTGGGG -3'这些引物包含 Hind III 和 Xho I 限制性位点（下划线）使用质粒 pcDNA3.1-CD163-D4 和......