讨论

应用疾病模型进行筛选实验是现代医学科学的一个重要研究手段，因此建立可靠的疾病模型对于药物筛选来说极其重要。本实验拟建立胰岛素抵抗的细胞模型来筛选药物的有效部位，选定合适的细胞来源是首要任务。肝脏是人体内物质代谢的中心，在糖代谢中起着非常重要的作用。并且肝脏是人体胰岛素受体最密集的器官之一, 对胰岛素的促摄糖作用极为敏感。本实验选用来源于肝细胞、具有肝细胞生物特性的 HepG2细胞经高胰岛素诱导使之成为胰岛素抵抗的细胞模型, 在一定程度上模拟了胰岛素抵抗的自然发病过程。HepG2细胞表面的胰岛素受体数目受胰岛素水平和作用时间的调节，当胰岛素受体数目下调到一定程度时, 则该细胞对胰岛素的作用产生抗性。

本实验中，通过胰岛素体外诱导法确定HepG2 细胞胰岛素抵抗的最佳作用时间及作用浓度，建立胰岛素抵抗模型。实验结果显示，不同浓度胰岛素刺激HepG2细胞，诱导IR时，1 × 10-7mol/L的胰岛素作用24h后细胞的葡萄糖消耗量最低，且细胞存活率也不受影响，故确立1 × 10-7mol/L的胰岛素浓度为胰岛素抵抗的最佳浓度，24h为胰岛素抵抗作用的最佳时间。该条件为本次实验的建模条件。

用不同浓度的狗牙根各萃取部位作用于正常HepG2细胞以确定给药浓度，结果发现除了乙酸乙酯部位在25、50、100 g/ml浓度时显著抑制细胞增殖，有一定的细胞毒作用之外，其余各不同浓度萃取部位对细胞均无明显的细胞毒作用，因此确定各萃取部位的给药浓度为1.5625、3.125、6.25、12.5 g/ml。利用所建立的胰岛素抵抗模型对狗牙根各萃取部位的活性进行筛选，结果发现，乙酸乙酯部位、石油醚部位和正丁醇部位在实验给药浓度范围内均具有较好的活性，而相比之下，乙酸乙酯部位表现出较好的剂量依赖性，活性也更好一些；总提物在12.5 g/ml时和水部位在1.5625、6.25g/ml时也表现出一定的活性，但是相对乙酸乙酯部位、石油醚部位和正丁醇部位而言其活性较差。

结论

本实验选用1×10-7mol/L胰岛素作用24h建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，并利用该模型对狗牙根各萃取部位进行活性筛选，实验结果发现狗牙根总提取物及各萃取部位对高胰岛素诱导的IR-HepG2模型均有一定的改善作用，其中乙酸乙酯部位的活性相对最好，其次是石油醚和正丁醇部位，总提取物和水部位的活性相对较差。