红景天属珍惜药用植物。近年来，为了满足巨大的临床需求和科研的需要，造 成红景天资源匮乏。而且由于该植物多分布于高原地区，采集困难，所以现代研究 集中于发现其替代品。研究发现，植物内生菌和寄主植物具有同源性，其产生的次 级代谢产物可能具有和寄主植物中活性物质相同或相似的药效，从而可使植物内生 菌代替珍稀物种。而且在我国，很多地区的植物内生菌的资源十分多产，品种繁多， 普遍存在于水生植物和陆生植物中，因此成为微生物的重要来源之一。

目的：对红景天L10  菌株进行发酵培养，提取发酵液或菌丝体中的次级代谢产物，并对其化学成分进行研究，预期从中分离得到 3-5 个单体化合物。

方法：采用适当的菌株培养方法进行扩大培养，利用溶剂萃取法，柱色谱，薄 层色谱，高效液相色谱等方法，经过提取分离等步骤，对其代谢产物进行理化性质 研究。

结果：通过一些显色反应和波谱学鉴定实验，可确认 7   种化合物的结构分别为：

6- (1′- 2′-  二甲基氧环- 1′)- 4-  甲氧基- 3-甲基- 2H-  吡喃- 2-  酮（Ⅰ）、Wermopyrone

（Ⅱ）、4-  甲氧基- 3-  甲基- 6- (2-  甲叉- 1-  烯)- 2H-  吡喃- 2-  酮（Ⅲ）、Nectriapyrone

（Ⅳ）、补骨脂素（Ⅴ）、4-  羟基苯乙醇- 2′- (R)-  羟基丙酸酯（Ⅵ）、5-  羟甲基糠醛

（Ⅶ）。

结论：使用多种色谱手段分离出 7 种单体化合物，为后续的活性试验奠定基础。

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植物内生菌研究存在的难题

植物内生微生物由于其特殊的生长环境，结构多样的代谢产物以及良好的生物 活性而受到研究人员的广泛关注。它具有广阔的开发前景和巨大的待开发资源，看 起来前途光明。但作为一个研究人员，若想在这一巨大资源面前展开探索，必须正 面应对一些尚未解决的难题：

一，培养基种类研究有限，就算把已知的所有种类的培养基都应用一遍来培养组 织细胞，也无法保证可以把所有植物内生菌都分离出来。可能是因为有些菌株对生 长环境要求特殊，现有培养基无法满足其全部营养条件。也有可能跟分离时间和分 离部位有关，分离得到的并不是想要的目的菌株。所以，得到目的菌株的重点是如 何建立一个相同或相似的植物环境生态模型，以期真实反应内生菌的生态学特征。 这同时也是为下一步研究内生菌代谢产物提供了一个前提。

二，目前研究人员正在寻求一种方法，它可以直接在植物组织上对内生真菌进行 鉴定和研究，这可以极大节省工作人员花在扩大培养和分离目的菌株的时间。

三、直接从植物内生微生物中提取到的活性物质一般含量较低，有些甚至很难达 到检测最低量，导致许多工作无法展开，所以如何采用 OSMAC（One Strain-Many Compounds）策略激活某菌株潜在的生物代谢途径以获得更多的新类似物也成为了 研究的又一重点。

总之，机遇与挑战并存，植物内生微生物次级代谢产物的研究仍存在许多不可 预知的困难，但是其作为重要的新药研发途径之一，还是有着巨大的研究意义。

本次实验通过对一些植物内生菌的活性和生长习性进行观察和研究，将其应用 到红景天植株上，实时观察植株生长情况，以此为依据，不断调整培养条件，找到 内生菌代谢产物量和代谢产物种类都尽量最大的一个条件，以此条件扩大培养，.......