本试验研究了一株鸡源肠球菌的益生性能并对其包被效果进行了评价。从健康的AA肉仔鸡的小肠中分离菌株，经鉴定、测试其生长性能、产酸能力、病原菌抑制能力及逆性环境耐受力等指标筛选得到了一株性能优良的乳酸肠球菌。该菌株CG1.0038经初步鉴定为乳酸乳球菌，其生长速度快（代时＜30min）、延滞期短、产L-乳酸能力强（4.20g/L）、抑制病原菌（大肠杆菌K88/K99、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、巴氏杆菌）生长能力强、逆性环境（模拟胃、肠液）耐受力也较强。并且与未包被菌体相比，微囊化包被菌体对逆性环境的耐受力明显增强。该株乳酸乳球菌CG1.0038表现出优良的益生性能，作为饲用添加剂使用有较好的应用前景，而将微生物进行微囊化包被对益生菌的保护及制剂的开发有诸多益处。

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菌株总DNA的提取[16] 

煮沸法提取肠球菌总DNA：取1mL菌液，12000rpm离心2min，弃去上清液，加入1mLddH2O，12000rpm离心2min，弃去上清液，加300uLddH2O，沸水浴10min，放入-20℃冰浴10min，12000rpm离心2min，取上清液于灭过菌的1.5mL的离心管中。 

PCR产物扩增及其检测[17] 

正向引物： 5'-GAG TTT GAT CCT GGC TCA GGA CGA-3' ，反向引物： 5'-CGC ACC TTC CGA TAC GGG CTA CCT-3'（Botina et al,2006）,由上海英骏生物技术有限公司合成。

上游引物（24bp）1uL，下游引物（24bp）1uL，10×Buffer 5uL，Mg2+4uL，dNTP2uL，Ex Taq 酶1uL，模板3uL，ddH2O 35uL。反应程序:预变性95℃，5 min ；94 ℃变性30 s，58℃退火30 s ，72 ℃延伸50s，30个循环；72 ℃延伸5 min。

取10uL扩增产物加入2uL溴酚蓝染色液，混匀加在1%琼脂糖凝胶（含goldview2.5uL），1×TAE缓冲液中恒压80V电泳40min，用凝胶成像仪观察结果。将PCR产物样品寄送至上海英骏生物技术有限公司进行测序。

生长与代谢曲线的测定 

将低温保存的菌株按1%比例接入到MRS培养基中培养，在37℃，150rpm培养20h，每2h取样一次。对所取样品分别测定OD600和pH，每次处理做三个重复，记录数据并绘制生长曲线。使用生物传感仪分别测定菌体培养液中葡萄糖消耗量、乳酸产量及pH，记录数据并绘制代谢曲线[18]。

抑菌能力的测定[19]

采用牛津杯法测定所筛选菌株对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、鸡白痢沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及巴氏杆菌的抑制能力。 

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Biolog鉴定结果 

Biolog微生物自动分析系统主要根据细菌对糖、醇、酸、酯、胺和大分子聚合物等95种碳源的利用情况进行鉴定,其中A1孔是对照孔。Biolog系统鉴定结果主要有3个参数,即可能性(Probability,PROB)、相似性(Similarity, SIM)和位距(Distance,DIST),其中SIM值和DIST值是两个重要参数, DIST值表示测试结果与数据库相应数据条的位置, SIM值表示测试结果与数据库相应数据条的相似程度。Biolog系统规定：细菌培养4～6 h,其SIM≥0.75,培养16～24 h时, SIM≥0. 5时,系统自动给出鉴定结果为种名, SIM值越接近1.00,鉴定结果的可靠性越高；当SIM值小于0.5，但鉴定结果中属名相同的结果的SIM值之和大于0.5时，自动给出的鉴定结果为属名。鉴定结果如表2-3所示