本文主要介绍了我在实习单位学到的有关转染技术的一些知识并结合自己在实践中的经历对转染技术在医学上的应用对转染试剂将来的市场前景做出相应的预测，希望可以让读者对转染技术有进一步的了解。

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转染技术的方法及影响转染效率的因素

磷酸钙法

磷酸钙沉淀法是一种被普遍认为转染效率偏低的转染方法，并且操作也比较繁琐，但是这个方法是比较传统稳定的，容错率相对较高，所以在现阶段仍然被一些实验室所使用。接下来我就简单介绍一下它的相关原理。它的原理很简单，磷酸钙可以和DNA发生沉淀，沉淀后就容易被我们细胞的细胞膜所吸附，我们的目的是让这些DNA可以进入细胞之中而不是单单只是让它吸附在细胞膜的表面，所以接下来我们需要在细胞膜的表面进行打孔操作，这样就可以让DNA从这些小孔里进入细胞之中[6]。所以从这里我们就可以看出，这类方法操作起来真的会很繁琐，而且还要注意一点的是用这种方法进行转染的时间不能过长，因为在细胞膜表面进行打孔易导致细胞的大量死亡，这点要尤其注意。此外这种方法对PH值的要求也相对于要高一点，没有合适的PH环境的话，转染成功率就会大大降低，这是跟其他方法不一样的地方。还有就是我们在进行转染时，必须要确保环境里没有血清，因为这种方法是要让DNA发生沉淀，而血清的存在会阻止沉淀的产生，大大降低了转染效率。

电穿孔法

电穿孔法的特点很鲜明，它操作容易不繁琐，速度快，效率也很高，可以说是非常受欢迎的一种常用转染方法，它的缺点就是需要特殊仪器，所以代价会高昂一点。它的原理很简单就是通过外电场的作用来改变膜蛋白间的相互作用。在一定条件下细胞膜上的细小微孔可以逐渐变大，这个条件就是低强度的电磁脉冲。在这样的条件下，细胞膜上的那些细小孔就逐步扩大，扩大到可以让离子和生物大分子可以安全通过不受阻挡[6]。这种方法一定要注意控制好电场的强度，因为在高强度的电场下会使细胞膜蛋白脱出从而降低了细胞原有的稳定性，这样细胞就有可能变形，有的甚至会直接死亡。通过查找有关文献，我得知，电压维持在200~300V，电容在900~1000μF都可以使得转染效率大幅度提高。缓冲液的选择也显得很重要，我们对缓冲液的要求只要能充分溶解重组质粒，对细胞的生长不起到任何的副作用，这样的缓冲液就是可以使用的。总之使用电穿孔法一定要控制好电压和时间，电压过小，时间过短，转染效率就会低，电压过大，时间过长，就会直接导致细胞死亡[11]。

阳离子脂质体转染法

阳离子脂质体法顾名思义我们首先需要制备阳离子脂质体，脂质体的制备方法通常有超声波法、磷脂酰丝氨酸钙离子融合法、逆相蒸发法等。通常我们都是用后两个方法来制备，因为超声波法制备的脂质体不能往细胞内引入太多的物质，而后两种方法没有这样的限制。阳离子脂质体主要分为三类：第一类就是人工合成的阳离子去垢剂和DOPE共同组成，第二类就是天然的脂通过人工修饰加上一个阳离子基团和DOPE共同......