目的：实习期间，累积DNA测序实验的相关经验，掌握DNA测序原理及工艺流程，包括接菌、质粒提取、做反应、做沉淀、上3730测序仪等，通过实际遇到的问题，结合相关文献内容，最终提高自己的测序知识及操作能力，做到知识与实践能力共同提高。方法：通过日常工作模板和反应两大流程来完成。结果：通过解决测序工作中出现的问题来不断提高自身的操作能力，从而使实验结果达到客户的期望结果，提高公司的行业竞争力。

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前言

DNA测序的手段是分子生物学术研究中最常用的手段，它的出现大大地推动了生物科学的发展。越来越多的测序公司出现在人们的视野中。其实早在1970年中期DNA测序技术就开始有所成就。Maxam[1]和Gilbert。在 1977 年提出了采用化学降解测定 DNA序列的方法。而同时间段。Sanger[2]发表了双脱氧链终止法。1990年初荧光自动测序技术开始萌芽，促使DNA测序技术迈进了自动化测序的时代。以上技术都被称为第一代DNA测序技术。近几年发展起来的第二代DNA测序技术促使DNA测序进入高通量、低成本的时代。现在，以单分子[3]读取技术为基础的。第三代测序技术已经开始逐步进入市场。该技术测定DNA序列的速度更快，而且有希望使测序成本降低更多，使个人医疗朝更美好的方向发展。本文对DNA测序的工艺流程及研究进展做一个阐述。

DNA测序技术调查研究的目的及意义

DNA测序技术的飞速发展对探索人类基因组和遗传信息、以及对遗传病的早发现早预防有着非常重要的作用，通过在测序公司的工作内容与查阅文献，发现DNA测序存在的问题并努力解决遇到的难题，来使测序技术得到提升，从而使测序技术能更好地服务于生命科学的研究。

研究项目概况

DNA测序的工艺流程

测序的原理

通过运用双脱氧核苷酸，每次加入一种双脱氧核苷酸和4种脱氧核苷酸[4-7]。比如：一条序列为ATCGCTA。我们进行3次的双脱氧核苷酸的实验。第一次的时候加入双脱氧核苷酸A和正常的ATCG,这样我们就能得到下面两种序列，A ATCGCTA。因此我们就可以看出碱基A在序列的第一个和第7个碱基。同理运用双氧核苷酸T和C，就会得整个序列的对应碱基的位置信息。进而得到整条序列的ATCG的序列信息。

质粒提取流程

第一步：收集菌体。将摇菌板配平放入离心机3600r，离心3分钟，去上清，倒扣摇菌板放在吸水纸上轻磕，尽量去除上清。第二步：悬浮菌液。向摇菌板加入提前从冰箱拿出的P1（提前半小时拿出来，或放在水浴锅里加热37℃三分钟）200ul，先在漩涡混匀仪将菌体打散，再放在平板混匀仪上混匀1-2min。第三步：裂解菌体。向混匀的摇菌板中加入200ul的P2，在平板混匀仪上轻微（1档）混匀30S-1min，拿下来静置3min，待菌液变清亮。第四步：中和。向摇菌板中加入200ul的P3，在平板混匀仪上中档混匀3min，待蛋花状沉淀打散后，配平4200r离心2min，转400ul到过滤板里（不要吸到沉淀），下接1.3ml的浅孔板。第五步：吸附。配平离心到2000r即可，向浅孔板里加入10ul磁珠，旋涡震荡30S，再平板混匀3min，上磁力架，弃上清，倒扣在吸水纸上轻磕。第六步：纯化。加入200ul的80%乙醇或PW溶液（此刻浅孔板不放在磁力架上），混匀，吸附，弃上清。第七步：重复步骤6后倒扣......