目标：明确F01菌株抗病毒活性，解析其抗病毒作用方式。

内容：本研究小组前期从秦岭地区采集了80余份土样，从中分离到1株对TMV具有显著活性的放线菌F01菌株。本研究将以该菌株为研究对象，以心叶烟和TMV为材料，进一步分离鉴定该菌株抗病毒活性物质、探明其抗病毒作用机理，以期为研制新型抗烟草病毒微生物制剂提供试验依据。具体内容主要包括以下几个方面：

(1)F01菌株抗病毒活性物质粗提。将菌株通过摇瓶振荡培养法，离心获取发酵提取液。

(2)抗病毒活性物质室内生物测定。利用半叶枯斑法和叶圆片法测定活性物质抗病毒作用。

(3)抗病毒活性物质生化作用机制探讨。对同工酶PAL、POD酶活性变化及过氧化氢酶CAT酶含量变化进行测定。

(4)病程相关蛋白的表达检测。使用半定量RT-PCR法测定PR-1 和 PR-5基因表达量，（β-Actin基因作为内参基因）。

(5)提取物钝化病毒粒子形态观察。对提取液作用后的病毒粒子与完整的病毒粒子经透射电镜拍摄后进行形态学比较。

植物病毒病素来被人们称为“植物癌症”，使得农业经济在全世界范围内都造成了巨大损失。研究微生物代谢产物并从中筛选具有抗植物病毒活性成分，已经成为植物病毒抑制剂研究的热点。链霉菌F01菌株是从秦岭地区土壤中分离得到的一种放线菌，前期试验结果表明，F01菌株发酵液有较高的抗TMV活性。本论文釆用TMV为供试病毒、感病烟草K326为供试寄主，研究了链霉菌F01抗烟草花叶病毒的作用方式。试验结果表明，链霉菌F01可通过诱导系统提高烟草体内PAL、POD酶活，提高植物体内过氧化氢含量，提高病程相关蛋白PR-1、PR-3、PR-5基因表达量，从而提高烟草对TMV病毒的抵抗能力。

结论

（1）F01菌株抗病毒活性

链霉菌F01菌株发酵液对TMV具有较好的抑制活性，其中以抑制初侵染（保护）活性最为显著，为81.72%。

（2）F01菌株抗病毒作用方式

链霉菌F01菌株发酵液可以诱导提高烟草中PAL和POD酶活性，提高烟草过氧化氢的产生量，以及PR-1、PR-3、PR-5基因的表达量，从而提高烟草对TMV病毒的抵抗能力。