细胞色素C溶液用于各种组织缺氧急救的辅助治疗[1]。目前很多高发的疾病和难以治愈的慢性疾病都和细胞色素C有关。细胞色素C对细胞的凋亡，细胞组织的生长，对细胞器官的发育都有着很大的影响。细胞色素C广泛存在于人体细胞中所以细胞色素C对人体机能的平衡影响也非常大，因此细胞色素C的研究对生物学有着重大的意义。可以说细胞色素C的价值很高应用前景非常的广泛，细胞色素C在不仅临床急救的应用很广而且细胞色素C对很多慢性病的治疗也十分有效。

想要得到细胞色素C也十分简单，我们可以从动物体内提取细胞色素C，动物心脏中含有丰富的细胞色素C，本实验正是从猪心中提取细胞色素C。细胞色素是呼吸链中重要的电子传递体，细胞色素包含很多种，细胞色素C只是细胞色素的一种，细胞色素C主要存在于线粒体中，需氧最多的组织及酵母细胞和心肌细胞中，细胞色素C的含量非常的丰富。目前来看,心血管疾病、脑组织损伤、癌症、败血症、糖尿病和神经性的疾病在全球的发病率非常高,在这些疾病中细胞色素C均表现出不同程度的代谢紊乱。细胞色素C是由两个无活性的前体分子合成的，即前细胞色素C和亚铁血红素[2]。硫酸铵盐析可明显提高细胞色素C 纯度，主要为去除杂蛋白。另外三氯乙酸可引起细胞色素C 变性和聚合，必须严格控制三氯乙酸用量。细胞色素C（Cytochrome C）是从猪心中提取的细胞呼吸激活剂，是含铁卟啉的色蛋白质[3]。在心肌与其他做剧烈运动的肌肉中含量最为丰富。细胞色素C主要作为电子载体或者氧化还原酶参与细胞的能量传递过程[4]。硫酸铵盐析可明显提高细胞色素C 纯度，主要为去除杂蛋白。另外三氯乙酸可引起细胞色素C 变性和聚合，必须严格控制三氯乙酸用量[5]。细胞色素C是细胞凋亡的重要信息物质之一。发展简单、快速的细胞色素C的检测方法对于临床检测和生物学研究具有重要意义[6-7]。它在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着非常重要的意义[8-10]外源性细胞色素C......

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实验方法

细胞色素C的提取

取新鲜的猪心一颗，去除血块、肌腱和脂肪，切成条块状洗掉血液，用绞肉机将其绞碎。称取心肌碎肉，加入1到2倍量的蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L的硫酸调整PH到4左右，在常温条件下搅拌提取两个小时，然后进行压滤，滤液用1mol/L的氨水调节PH至6.2，离心，得到提取液。滤渣再加等量蒸馏水同上方法重复提取一次，合并两次提取液。提取液加入2mol/L氨水调节PH至7.5，再在冰浴中静置沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加入10g人造沸石，搅拌吸附40分钟，静置去掉上层清液。收集吸附细胞色素C的人造沸石，再用蒸馏水洗涤三次，2g/L的氯化钠洗涤4次，再用蒸馏水洗至洗液澄清为止。过滤抽干，装入柱内用25%硫酸铵溶液进行洗脱，得到洗脱液。

细胞色素C的纯化

将洗脱液加入固体硫酸铵达到45%的饱和度（相对密度1.21到1.23），使杂志蛋白析出，然后过滤。收集透明液体，然后慢慢加入20%的三氯乙酸（25ml/L，按体积计算），边加边搅拌使细胞色素C沉淀析出，离心收集沉淀。将沉淀溶于蒸馏水，装入透析袋中，用常水和蒸馏水透析至无硫酸根为止，最后过滤得到细胞色素C粗品溶液。

粗品溶液通过处理好的Amberlite IRC-50(NH4＋)树脂柱吸附，然后将树脂移入大烧杯中，用水洗到澄清为止，再分别上柱，用0.6mol/L磷酸氢二钠-0.4mol/L氯化钠混合溶液洗脱，流速2ml/min。洗脱液用蒸馏水透析去离子，得到细胞色素C精致液。

细胞色素C的含量测定

本实验得到的细胞色素C是氧化型和还原型的混合物，因此在测定含量时，要加入联二亚硫酸钠，使混合物中的氧化型细胞色素C转变为还原型。还原型......