系统发育邻接树分析

根据序列比对结果，将市场收集的14份南蛇藤药材和7份雷公藤药材的ITS2序列与前文已获得的基原物种的ITS2序列一起构建邻接（NJ）树（见图1）。

通过NJ树结果可看出，在14份南蛇藤药材样品ITS2序列中，9份与南蛇藤聚为一支,1份与雷公藤聚为一支,另外4份聚到其它支。7份雷公藤药材样品中，2份与雷公藤聚为一支，5份与苦皮藤聚为一支，NJ树鉴定结果与数据库比对结果一致。

讨论

本研究首次使用DNA条形码检测市场供应药材南蛇藤与雷公藤。所有的基原物种样本经过权威专家鉴定，且所有的ITS2序列真是可靠，因此我们构建了南蛇藤属以及雷公藤DNA条形码数据库用于种内和种间遗传距离分析。结果表明南蛇藤与南蛇藤属其他药用植物种间最小K2P距离大于南蛇藤种内最大K2P距离，且NJ树显示南蛇藤、雷公藤各自单独聚为一支，验证了最小距离法的结论；另外，在南蛇藤同属药用植物中，除短梗南蛇藤与宽叶短梗南蛇藤，长序南蛇藤与皱叶南蛇藤外，其他物种均各自聚为一支，能很好的区分开，证明了ITS2序列作为DNA条形码的通用性，且在南蛇藤同属药用植物中有较好的鉴定能力。

中药材的真伪，严重威胁着临床用药质量安全和有效，关系到中医药事业的发展，必须引起高度重视。正品药材缺乏以及药材种植的不规范性使得药材市场混乱[18]，中药材掺伪的问题依然严重，寻求更有效的手段解决掺伪问题十分必要。本研究从市场上随机购买15份南蛇藤药材和7份雷公藤药材，通过实验获取的ITS2序列分别为14条和7条，经与数据库比对鉴定，并结合已知基原物种序列建立NJ树从而确定其真伪，结果表明，从14份南蛇藤药材ITS2序列中检测出9个正品和5个混伪品，7份雷公藤药材ITS2序列中检测出2个正品和5个伪品，并且发现南蛇藤中混有雷公藤，该方法实现了对药材市场供应的南蛇藤、雷公藤药材的快速、准确鉴定，同时证实了ITS2序列作为药材可追溯技术的可靠性。

结论

本研究基于ITS2序列进行药材南蛇藤的溯源研究，并检测市场供应的南蛇藤、雷公藤药材是否存在混伪品，结果证明，ITS2序列不仅能成功区分南蛇藤同属药用植物，还能鉴别南蛇藤与其混伪品雷公藤，且建立的南蛇藤药材ITS2可追溯技术能实现对市场供应的药材南蛇藤、雷公藤的真伪判定。为南蛇藤同属药用植物以及雷公藤的鉴定提供了分子依据，保障其临床用药的安全、有效。